2X 探针法qPCR Mix （TaqMan荧光定量PCR试剂盒）是基于荧光探针检测的即用型 PCR 试剂盒，可以对靶片段进行实时定量 PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。

产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量 PCR 所需要的成分

荧光定量PCR（qPCR）是大家常用的分子生物学技术，根据实验方法的不同

qPCR可以分为染料法（SYBR Green法为代表）和探针法（Taqman法为代表）

因为操作简单，价格便宜，SYBR Green法qPCR 受到了更为普遍的使用。

但是SYBR Green法并非万能的，在很多时候SYBR Green无法满足实验的需要

Taqman qPCR特异性强，信噪比高，能够适用于多重qPCR，数据更具说服力

Taqman法qPCR的原理:

Taqman是一段短的单链DNA探针，能够和模板DNA进行退火。Taqman探针的5’端带有一个报告基团（R），3’端带有一个猝灭基团（Q）。报告基团所发出的荧光会被猝灭基团所吸收，因此正常情况下荧光探针是不会发出荧光的。在PCR的延伸过程中，DNA聚合酶沿着模板链从5’到3’的方向合成新链，当DNA聚合酶到达Taqman探针结合位点时，DNA聚合酶的5’-3’外切酶活性会将Taqman探针进行水解，导致Taqman探针的报告基团脱离了猝灭基团，从而发出荧光。可以根据荧光值的高低，判断PCR过程中目的片段产生的多少，从而实现对目的基因进行实时定量。

在Taqman qPCR中，上下游引物只有扩增探针所结合的片段时，才会产生荧光，非特异扩增是不会产生荧光的，因此Taqman qPCR的特异性非常好。另外，可以用不同的报告基团，标记多个荧光探针，实现在一管PCR体系中，同时对多个基因进行定量，这样不仅实验的通量大大提高，而且实验的一致性也更好。

什么时候需要使用探针法qPCR:

相对于SYBR Green qPCR，探针法qPCR需要设计和合成特异的荧光探针，增加了设计难度和实验成本。但是，当你遇到如下情况时，Taqman qPCR是你的第一选择。

>>>1.基因检测

以Taqman为代表的探针法qPCR最常用的应用场景就是基因检测，包括医疗诊断，环境微生物检测，转基因检测等。这些应用场景对结果的特异性要求非常高，而染料法qPCR的结果很容易受到非特异性扩增的干扰，因此一般都是使用Taqman qPCR进行检测。

>>>>2.很难设计特异性引物

qPCR对引物的扩增效率要求很高，如果用相对定量法（Livak法）进行数据分析，需要保证引物的扩增效率在90%到105%之间，否则最后得到的数据不真实。然而有时候，为了保证扩增的特异性，只能在某个特异位点设计引物，从而牺牲了一些其它的引物设计原则，比如GC含量过高，引物有二级结构等，导致qPCR扩增的效率过低。这种情况下用Taqman qPCR可以很好的解决这一点，因为Taqman 探针本身就可以保证特异性，因此设计引物的时候有更多灵活性，更容易设计扩增效率高的引物对。

>>>>3.发表高水平文章

由于Taqman法比SYBR Green法具有更好的特异性，实验结果更接近真实，所以很多高水平文章更青睐于Taqman qPCR的结果。特别是一些关键基因的关键结果，如果有Taqman qPCR的数据，会给你的文章加分不少。